細胞培養實驗室的設置
时间：2021/8/12 14:54:20
組織細胞培養技術與其他一般實驗室工作的要紧區別在于要求保全無菌操作，幸免微生物及其他有害因素的影響。目前，超淨工作台的廣泛使用，很大程度上便宜了組織細胞培養工作，並使一些常規實驗室有也许用于進行細胞培養。
组织細胞培養技术与其他一般实验室工作的要紧区别在于要求保全无菌操作，幸免微生物及其他有害因素的妨碍。目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上便宜了组织細胞培養工作，并使一些常规实验室有也许用于进行細胞培養。
細胞培養实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处置、储藏。
1．無菌操作區
（1）无菌操作室：无菌操作区只限于細胞培養及其他无菌操作的区域，好能与外界割裂，不能穿行或受其他干扰。 理想的无菌操作室应划为三部分：
a) 解手室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 缓冲间—―位于解手间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置常温培养箱及某些必须的小型仪器。
c) 无菌操作间—―专用于无菌操作、細胞培養。其大小要适当，且其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌结果；墙壁滑溜无死角以便干净和消毒。工作台安置不应靠墙壁，台面要滑溜压塑作外表，漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。
無菌操作間的空氣消毒：
紫外线灯—－产生臭氧，同时室内温度及湿度均较高，不顺于工作人员健康。 空气过滤的常温恒湿装置—－最 好。
表1 洁净室（区）空气洁净度级别表
洁净度级别 尘粒最大同意数／立方米 微生物最大同意数 浮游菌／立方米 沉降菌／皿
100级 3,500 0 5 1
10000级 350,000 2,000 100 3
100000级 3,500,000 20,000 500 10
300000级 10,350,000 60,000 - 15
無臭氧紫外線消毒器
电子消毒灭菌器—－在压服电场作用下，电子管的内外电极产生强烈电子轰击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体充满性扩散达成杀菌之目的，消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需30～40min即能自行还原成氧气，空气不留异味，消毒物体外表不留残毒。
（2）净化工作台：操作简单，安装便宜，占用空间小且净化结果很好。一般细菌培养室使用的净化工作台要紧有两种：a)侧流式或称铅直式 b)外流式或称水平层流式。
净化工作台工作原理（大体雷同）—－通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
外流式（水平式）工作台—－净化后的空气面向操作者固定，因而外方气流不致混入操作，但进行有害物质实验操作则对操作者不顺。工作台结构为开放式（已少用）。
淨化工作台應用注重：
（1）淨化工作台應安裝在隔離好的無菌間或清潔無塵的房間內，以免塵土過多易使過濾器堵塞，降低淨化结果，縮短其使用壽命。
（2）新安裝的或長期未使用的工作台，工作前必須對工作台和周圍環境用真空吸塵器或不産生纖維的工具進行清潔工作，然後再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌進行滅菌處理。
（3）使用淨化工作台前，應先用75％酒精擦洗台面，並提早以紫外線滅菌燈照射30～50min處理淨化工作區內積存的微生物。關閉滅菌燈後應啓動風機使之運轉兩分鍾後再進行培養操作。
（4）淨化工作區內不應存放不需要的物品，以保全潔淨氣流流型不受幹擾。
（5）注重淨化區內氣流的變化，一旦感觉氣流變弱，如酒精燈火焰不動，加大電機電壓仍未見情況改變則說明濾器已被堵塞，應及時更換。一般情況下，高效過濾器三年更換一次。更換高過濾器應請專業人員操作，以保全密封良好。粗過濾器中的過濾布（無紡布）應时限清洗更換，時間應根據工作環境潔淨程度而定，通常間隔3-6個月進行一次。
（6）淨化工作台使用完畢應及時清理工作台面上的物品並用酒精擦洗台面使之始終保全潔淨。
（7）淨化工作台應时限進行功能測試，檢查淨化工作台各項工作指標是否達到要求，例如進行無菌試驗，时限檢查台面空氣的潔淨度是否達標。
超净工作台的无菌程度检查超净工作台在消毒处置后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm平皿，在超净工作台内焚烧酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃预培养48小时，证明无菌后将平板72670个，以无菌方法带入超净工作台内左、中、右各放一个；打开平皿盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好，置30～35℃培养48小时，取出检查，100级干净度要求：72670个平皿上生长的菌落数均匀不得超过23个。
超净工作台应时限请有关部门检查其洁净度，应达成100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测尘埃粒径≤5祄的粒数不得超过3.0245个／升；空气流量应控制在0.75~1.0m3/s；细菌菌落数均匀<23个，可依据无菌状态需要时置换过滤器。 2．孵育区
本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需干净无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者花费高，一般实验室多采用孵箱进行工作。
3．制備區
在该区要紧进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
4．儲藏區
要紧存放各类冰箱、干亢箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要干净无尘。
5．清洗和消毒滅菌區
干净和消毒灭菌区应与其他区域划分，要紧进行所有細胞培養器皿的清洗、打算、消毒及三蒸水制备等工作。
細胞培養实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处置、储藏。
1．無菌操作區
（1）无菌操作室：无菌操作区只限于細胞培養及其他无菌操作的区域，好能与外界割裂，不能穿行或受其他干扰。 理想的无菌操作室应划为三部分：
a) 解手室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 缓冲间—―位于解手间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置常温培养箱及某些必须的小型仪器。
c) 无菌操作间—―专用于无菌操作、細胞培養。其大小要适当，且其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌结果；墙壁滑溜无死角以便干净和消毒。工作台安置不应靠墙壁，台面要滑溜压塑作外表，漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。
無菌操作間的空氣消毒：
紫外线灯—－产生臭氧，同时室内温度及湿度均较高，不顺于工作人员健康。 空气过滤的常温恒湿装置—－最 好。
表1 洁净室（区）空气洁净度级别表
洁净度级别 尘粒最大同意数／立方米 微生物最大同意数 浮游菌／立方米 沉降菌／皿
100级 3,500 0 5 1
10000级 350,000 2,000 100 3
100000级 3,500,000 20,000 500 10
300000级 10,350,000 60,000 - 15
無臭氧紫外線消毒器
电子消毒灭菌器—－在压服电场作用下，电子管的内外电极产生强烈电子轰击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体充满性扩散达成杀菌之目的，消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需30～40min即能自行还原成氧气，空气不留异味，消毒物体外表不留残毒。
（2）净化工作台：操作简单，安装便宜，占用空间小且净化结果很好。一般细菌培养室使用的净化工作台要紧有两种：a)侧流式或称铅直式 b)外流式或称水平层流式。
净化工作台工作原理（大体雷同）—－通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
外流式（水平式）工作台—－净化后的空气面向操作者固定，因而外方气流不致混入操作，但进行有害物质实验操作则对操作者不顺。工作台结构为开放式（已少用）。
淨化工作台應用注重：
（1）淨化工作台應安裝在隔離好的無菌間或清潔無塵的房間內，以免塵土過多易使過濾器堵塞，降低淨化结果，縮短其使用壽命。
（2）新安裝的或長期未使用的工作台，工作前必須對工作台和周圍環境用真空吸塵器或不産生纖維的工具進行清潔工作，然後再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌進行滅菌處理。
（3）使用淨化工作台前，應先用75％酒精擦洗台面，並提早以紫外線滅菌燈照射30～50min處理淨化工作區內積存的微生物。關閉滅菌燈後應啓動風機使之運轉兩分鍾後再進行培養操作。
（4）淨化工作區內不應存放不需要的物品，以保全潔淨氣流流型不受幹擾。
（5）注重淨化區內氣流的變化，一旦感觉氣流變弱，如酒精燈火焰不動，加大電機電壓仍未見情況改變則說明濾器已被堵塞，應及時更換。一般情況下，高效過濾器三年更換一次。更換高過濾器應請專業人員操作，以保全密封良好。粗過濾器中的過濾布（無紡布）應时限清洗更換，時間應根據工作環境潔淨程度而定，通常間隔3-6個月進行一次。
（6）淨化工作台使用完畢應及時清理工作台面上的物品並用酒精擦洗台面使之始終保全潔淨。
（7）淨化工作台應时限進行功能測試，檢查淨化工作台各項工作指標是否達到要求，例如進行無菌試驗，时限檢查台面空氣的潔淨度是否達標。
超净工作台的无菌程度检查超净工作台在消毒处置后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm平皿，在超净工作台内焚烧酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃预培养48小时，证明无菌后将平板72670个，以无菌方法带入超净工作台内左、中、右各放一个；打开平皿盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好，置30～35℃培养48小时，取出检查，100级干净度要求：72670个平皿上生长的菌落数均匀不得超过23个。
超净工作台应时限请有关部门检查其洁净度，应达成100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测尘埃粒径≤5祄的粒数不得超过3.0245个／升；空气流量应控制在0.75~1.0m3/s；细菌菌落数均匀<23个，可依据无菌状态需要时置换过滤器。 2．孵育区
本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需干净无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者花费高，一般实验室多采用孵箱进行工作。
3．制備區
在该区要紧进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
4．儲藏區
要紧存放各类冰箱、干亢箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要干净无尘。
5．清洗和消毒滅菌區
干净和消毒灭菌区应与其他区域划分，要紧进行所有細胞培養器皿的清洗、打算、消毒及三蒸水制备等工作。
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